Maestría en Ciencias en Biotecnología Agrícola Departamento de Enseñanza, Investigación y Servicio en Fitotecnia, 2010. Maestría

El fríjol (Phaseolus vulgaris L.) es un alimento básico de gran importancia económica alrededor del mundo, en particular en los países en desarrollo; sin embargo su crecimiento es afectado por las condiciones climáticas restringiendo el rendimiento de grano, en México se produce principalmente en ambientes con precipitación errática donde la sequía causa bajos rendimientos de grano, y el mejoramiento genético para resistencia a sequía en frijol se ha basado en métodos tradicionales, pero la ingeniería genética puede acelerar este proceso. Se optimizo un protocolo de regeneración para P. vulgaris, encontrando que es más factible trabajar con ejes embrionarios obtenidos de plántulas germinadas en un medio con 1.0 mg·l-1 de BA y 1.0 mg·l-1 de tiamina por 5 días, reduciendo los niveles de oxidación y manteniendo el porcentaje de formación de callo en el undo cotiledonar. Y para incursionar en la transformación genética denominada SAAT (Transformación medida por Agrobacterium asistida por sonicación), se evaluó el efecto de diferentes tiempos de exposición de ultrasonido sobre la capacidad de regeneración in vitro de frijol, plantas germinadas en oscuridad son más sensibles a tratamientos de ultrasonido (91.67 % de mortalidad), mientras que las germinadas en luz solo presentan problemas de oxidación, y tratamientos prolongados (10 minutos) reducen la capacidad de regeneración in vitro, mientras que tiempos cortos (90 segundos) incrementan la capacidad de formación de callo en el nudo cotiledonar y los brotes son de mayor calidad. Cinco minutos de ultrasonido afectan la capacidad de formación de callo, generando la brotación de yemas adventicias, pero con lo anterior se puede incursionar en el proceso de trasformación genética. Utilizando SAAT, ejes embrionarios de plantas de cinco días de germinación se sometieron a la infección de Agrobacterium tumefaciens con la cepa LBA4404 utilizando sonicación por 5 minutos e infiltración por vacio por 5 minutos. Se lograron obtener 138 explantes resistentes a 0.5 mg·l-1 de PPT (6.16 %) y solo 13 plantas aclimatadas de un total de 2240 ejes infectados (0.58 %), mismas que murieron por efecto de A. tumefaciens, pues se volvió sistémica y mato los brotes tanto in vitro como ex vitro.

ALEPH 10 20130110

BATCH-UPD 10 20130110

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BATCH-UPD 10 20140324

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CONVERSION 10 20130109