Ingeniero Agrónomo Especialista en Fitotecnia Departamento de Enseñanza, Investigación y Servicio en Fitotecnia, 2019. Licenciatura

Incluye referencias bibliográficas: páginas 80-85.

Se aborda uno de los cultivos más importantes y antiguos en el mundo: el Trigo (Triticum aestivum L.). Específicamente el uso del cultivo de tejidos in vitro de embriones maduros para obtener callos y la agroinfección con Agrobacterium temefaciens de los mismos, además de presenciar los cambios a nivel histológico que ocurre durante la morfogénesis. Se utilizaron embriones maduros de trigo variedad Rebeca F2000 y Kronstad F2004. Por una parte, se cultivaron callos en medio CM4C hasta las cuatro semanas de edad, a través de las cepas de A. temefaciens: LBA4404, EHA105, C58C1 y GV3101, se les insertó el gen quimérico CaMV35S: Gusint, mediante el vector binario pGUSint con el gen de selección a kanamicina (NPTII) una absorbancia del cultivo bacteriano de A600nm=1.0, en medio de agroinfección CM4C suplementado con 200 μM de acetosiringona, cinco repeticiones de diez callos por cepa y un control negativo. Posteriormente se aplicó la prueba X-Gluc para observar la expresión transitoria. Al mismo tiempo, durante el cultivo de tejidos se tomaron y fijaron en solución FAA callos de distintas edades, se incluyeron en parafina y se obtuvieron cortes histológicos de 12μ de grosor, se aplicó tinción con safranina y verde rápido, al observar en microscopio, se describió la evolución de los tejidos durante el cultivo in vitro, así como el origen de los mismos. En los experimentos de transformación de los callos, la mejor cepa fue EHA105 con 22% de eficiencia y seguida de C58C1 con 16%, mientras que los callos agroinfectados con LBA4404 y GV3101 no mostraron evidencia de transformación genética. Se concluyó que el comportamiento durante el cultivo in vitro es similar para ambas variedades; el embrión original (cigótico) se desarrolla normalmente en un inicio pero luego se deforma y se pierde dentro del cuerpo del callo aunque se mantienen los tejidos vasculares formados; la morfogénesis observada fue producto de organogénesis desarrollando embriones somáticos incompletos (carentes de radícula), generados en un principio por divisiones mitóticas del eje embrionario y estructuras de la plúmula, formando callo, que después se comportan como un embrión/brote. Dentro del cuerpo del callo y embriones somáticos se desarrollaron tejidos secundarios funcionando como conexión entre el cuerpo materno y los embriones.